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microRNA研究攻略
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雙熒光素酶檢測【啟動子活性分析】
雙熒光素酶檢測【miRNA對靶基因調(diào)控研究】
 
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microRNA研究攻略

   MicroRNA (miRNA) 是一類由內(nèi)源基因編碼的長度約為22 個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,它們在動植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因表達調(diào)控。microRNA的表達、抑制或過表達對于研究基因功能有重要的意義。目前信諾金達對于microRNA研究相關(guān)的服務(wù)如下:

1. microRNA qPCR定量檢測

檢測microRNA的差異表達,各種無傳染性致病性樣品均可提供(如果是這里樣品,請?zhí)峁┛俁NA或小RNA)。提供登錄號(http://www.mirbase.org/ )或microRNA序列。我們出具詳細實驗報告,莖環(huán)法或加尾法反轉(zhuǎn)錄均可選擇,服務(wù)的連接如下:

miRNA熒光定量PCR

2. microRNA載體構(gòu)建

動物或植物microRNA的過表達載體或抑制表達載體均可構(gòu)建。過表達載體可以表達pre-miRNA或atmiRNA;抑制表達可以合成miRNA inhibitor或構(gòu)建STTM的抑制表達載體,詳細介紹,請點擊下面鏈接:

植物miRNA過表達/抑制表達載體構(gòu)建

動物miRNA載體構(gòu)建

3. microRNA靶位點結(jié)合預(yù)測及雙熒光素酶載體構(gòu)建,熒光素酶檢測

miRNA通過堿基互補配對的方式識別靶基因的3’UTR區(qū),并根據(jù)互補程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。根據(jù)軟件或數(shù)據(jù)庫預(yù)測靶位點及構(gòu)建靶位點的熒光素酶載體并檢測。詳細介紹,請點擊下面鏈接:

雙熒光素酶報告基因檢測【miRNA對靶基因調(diào)控研究】

4. microRNA轉(zhuǎn)染細胞后,靶基因的表達檢測

細胞培養(yǎng),mimics或inhibitors轉(zhuǎn)染,或表達,抑制載體轉(zhuǎn)染,檢測下游基因的mRNA表達或蛋白水平的表達,或蛋白之間的互作:

細胞培養(yǎng)、模型建立、功能分析技術(shù)服務(wù)

熒光定量PCR(qPCR)實驗技術(shù)服務(wù)

Western Blot

IP 和Co-IP

參考文獻

1.Kluiver J, Gibcus JH, Hettinga C, Adema A, Richter MKS, et al. (2012) Rapid Generation of MicroRNA Sponges for MicroRNA Inhibition. PLoS ONE 7(1): e29275. doi:10.1371/journal.pone.0029275

2.Tang G, Yan J, Gu Y, Qiao M, Fan R, Mao Y, Tang X. (2012) Construction of short tandem target mimic (STTM) to block the functions of plant and animal microRNAs. Methods 58(2):118-25.

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